Как Уровень Фосфорилирования Определен?
Уровень фосфорилирования органических молекул или веществ определен двумя методами: вестерн-блоттинг и масс-спектрометрия. Фосфорилирование чаще всего обращается к добавлению фосфата к белку. Когда фосфаты присоединяются к protiens, самопроизвольные процессы и функции ферментов белка в пределах человеческого тела нарушен. Определение уровня фосфорилирования крайне важно для обрабатывания в широких пределах из болезней, от рака до диабета.
Вестерн-блоттинг является популярным методом, используемым, чтобы определить уровень фосфорилирования специфического набора белков. Антитела, такие как моноклональные антитела "анти-фосфиновый тирозин" обычно используются, потому что они легко затвердевают к остаткам тирозина белка, на которые затрагивает фосфорилирование. В вестерн-блоттинге белки сначала отделены размером, используя электрический метод налога, известный как электрофорез в геле.
белки тогда переданы мембране, которая была покрыта специальными антителами, которые затвердевают к фосфатам на белках. Как только белки переданы, антитела будут придерживаться любых белков с присоединенным фосфатом. Уровень фосфорилирования может тогда быть определен рентгеном мембраны. Любые затронутые белки испустят вспышку света, облегчающего для исследователя измерить уровни фосфорилирования.
Масс-спектрометрия - другой способ измерить уровень фосфорилирования вещества. Этот процесс преобразовывает молекулы белка в ионы, который делает их легче сопровождать и иметь размеры. Образец ионизирован высокопроизводительным ионным источником, который наводняет образец электронами. Это действие превращает образец в катионы, положительно заряженные ионы.
Масс-спектрометр масс-спектрометра отделяет ионы их массой и интенсивностью налога. Это позволяет исследователю обнаруживать массу к соотношению реагирующих веществ, которая важна в обнаружении уровня фосфорилирования образца. Наконец, детектор измеряет ионы в заказе так, чтобы данные могли быть показаны в форме диаграммы. Выходы диаграммы масса к соотношению реагирующих веществ ионов на оси X, и относительная интенсивность ионов на оси Y.
Уровни фосфорилирования могут также быть измерены во время фосфорилирования субстрата. Фосфорилирование субстрата - процесс, который создает аденозин, средний фосфорнокислый (ATP), молекула, важная по отношению к энергетической передаче среди клеток, во время гликолиза. Этот процесс происходит и в животных клетках и в растительных клетках.
В растительных клетках, молекулы ATP созданы при использовании энергии из солнца. Эта энергия поощряет фосфорилирование в хлоропластах растения, месте фотохимического синтеза растения. Уровень коррелятов фосфорилирования на сумму фосфата должен был создать дополнительные молекулы ATP.